Los médicos a menudo desean determinar qué tipo de bacteria está presente en un paciente que tiene una infección. Por lo tanto, los profesionales deben realizar varias pruebas, y una de esas pruebas es el procedimiento de tinción de gram. Los expertos utilizan el procedimiento de tinción de Gram como una de las técnicas para diferenciar 2 grupos de bacterias según sus características de pared celular. Se trata de usar un tinte para ver qué bacterias retienen el color: violeta o rojo en sus paredes celulares.
Contenido
Cuándo aplicar la tinción de Gram
- El procedimiento de tinción de Gram se utiliza para determinar si las bacterias son grampositivas o gramnegativas. Este suele ser el primer paso en el proceso de identificación de bacterias que están presentes en los cultivos.
- Este procedimiento es importante para dar una idea del diagnóstico en personas con enfermedades infecciosas. También ayuda en la estimación del recuento total de las bacterias.
- Los médicos pueden realizar una elección empírica sobre el tipo de antibióticos que pueden recetar a un paciente, según los resultados del procedimiento de tinción de gram.
- La elección de un medio de cultivo que se utilizará para la inoculación también se puede realizar empíricamente según el informe de tinción de gram.
¿Cómo se realiza el procedimiento de tinción de Gram?
1. Preparar la diapositiva microscópica de vidrio
Para asegurarse de que sus diapositivas estén libres de grasa / aceite, primero debe lavarlos con agua y jabón y luego limpiar los portaobjetos con alcohol. Esto eliminará cualquier huella digital o suciedad. Seque los portaobjetos y colóquelos en toallas de laboratorio hasta que estén listos para ser utilizados.
2. Etiqueta las diapositivas
Dibuje un círculo debajo de las diapositivas con un rotulador diseñado para cristalería. Esto ayudará a designar qué área para preparar el frotis en el siguiente paso. También puede etiquetarlos con las iniciales del organismo en el borde de cada diapositiva. Tenga cuidado de que las etiquetas no entren en contacto con los reactivos utilizados para la conservación.
3. Preparar el frotis
Para hacer una suspensión bacteriana en el caldo , use un asa estéril enfriada para colocar una pequeña cantidad de caldo en su diapositiva. Usando un movimiento circular, extienda el caldo con el bucle de inoculación hasta que tenga aproximadamente 1 cm de diámetro. No se extienda excesivamente para evitar la interrupción de la disposición celular. Un frotis adecuado permite el examen de células aisladas y su disposición celular característica.
Para hacer un cultivo de placa bacteriana , use un bucle estéril enfriado y coloque una gota de solución salina o agua estéril en un portaobjetos. Después de volver a esterilizar y enfriar el circuito, recoger una pequeña muestra de colonia bacteriana. Agite suavemente la colonia en el agua o solución salina en la diapositiva y haga una emulsión.
Para muestras de hisopos, pase un hisopo sobre un portaobjetos de vidrio limpio
Nota: Evite preparar un frotis denso y denso con un exceso de muestra bacteriana. Esto evitará que pase la luz y dificultará la visualización de la morfología celular. Los frotis usualmente requieren pequeñas cantidades de cultivo bacteriano solamente. Un frotis ideal consiste en una película fina blanquecina después del proceso de fijación por calor.
4. Fijación de calor
Este paso elimina las bacterias en el frotis y las hace adherirse firmemente al portaobjetos, lo que permite que la muestra retire las manchas más fácilmente. Seca al aire tu frotis. Mientras sostiene el portaobjetos en un extremo (con el lado de frotis hacia arriba), pase el portaobjetos a través de la llama de un mechero Bunsen, 2-3 veces. Evite el sobrecalentamiento para evitar la coagulación y la distorsión de las proteínas en la muestra. Ahora estás listo para el procedimiento de tinción de gram.
5. Tinción de Gram
- Coloque el frotis de calor en una bandeja de tinción.
- Inundar su frotis suavemente con cristal violeta. Déjalo reposar por un minuto.
- Incline ligeramente el portaobjetos y enjuague suavemente con agua del grifo o agua destilada usando una botella de lavado.
- Ahora inunda el frotis suavemente con yodo de Gram. Déjalo reposar por un minuto.
- Incline ligeramente la diapositiva y enjuague suavemente con agua del grifo o agua destilada de una botella de lavado. Ahora su frotis aparecerá púrpura en su diapositiva.
- Usando acetona o alcohol etílico al 95%, decolorar el frotis. Incline ligeramente la diapositiva y aplique alcohol por gotas durante 5-10 segundos hasta que el líquido salga limpio. No decolorar en exceso.
- Enjuague inmediatamente con agua.
- Contraataca inundando suavemente el frotis con safranina. Dejar reposar durante unos 45 segundos.
- Incline ligeramente la diapositiva y enjuague suavemente con agua del grifo o agua destilada de una botella de lavado.
- Seque con papel bibuloso.
- Examine el frotis bajo un microscopio óptico (inmersión en aceite).
¿Qué resultados dice el procedimiento de tinción de Gram?
El procedimiento de tinción de Gram ayuda a distinguir las bacterias con paredes celulares más gruesas de aquellas con paredes celulares más delgadas, debido a la cantidad de peptidoglicano en sus paredes. Las células con paredes más delgadas tienen más de una capa de lipopolisacáridos que los peptidoglicanos en sus paredes.
El cristal violeta y el yodo entran en ambos tipos de paredes celulares bacterianas y se combinan para convertirse en moléculas más grandes dentro de estas paredes. Sin embargo, cuando se lavan con alcohol, las bacterias con paredes celulares más gruesas que contienen peptidoglicanos tienden a retener estas moléculas y permanecen de color violeta, por lo que se denominan bacterias grampositivas. Por otro lado, el tinte se elimina de las bacterias con paredes celulares más delgadas, y éstas se consideran gramnegativas. Los últimos no se vuelven incoloros, sino que se tiñen de rosa con safranina.