La prueba de antiglobulina, también conocida como prueba de Coomb, es una herramienta de diagnóstico empleada con frecuencia que se utiliza para la detección de trastornos inmunohematológicos e inmunológicos. Según la técnica y los objetivos, existen dos variedades de pruebas de antiglobulina: la prueba de antiglobulina directa (DAT) / prueba de Coomb directa (DCT), y la prueba de antiglobulina indirecta (IAT). Es imperativo mencionar que la prueba directa de antiglobulina se usa para detectar un tipo especial de anemia causada por un funcionamiento anormal del sistema inmunológico. El cuerpo humano está equipado para producir anticuerpos para identificar y atacar patógenos extraños. Pero en algunos casos, el sistema inmunitario sintetiza anticuerpos que atacan y destruyen los glóbulos rojos (o glóbulos rojos en nuestro cuerpo) para causar anemia hemolítica.
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¿Cuándo necesita realizarse una prueba directa de antiglobulina?
Cuando su médico no está seguro de si los anticuerpos están adheridos a sus glóbulos rojos, la prueba directa de antiglobulina puede ayudar en esa situación. Los escenarios comunes en los que su médico puede recomendar la prueba directa de antiglobulina incluyen: indicaciones postransfusionales de anemia hemolítica y, en ocasiones, diagnóstico de recién nacidos si la madre desarrolló anticuerpos contra los eritrocitos fetales y se la transmitió al bebé durante la vida intrauterina. Si no se detecta, las posibilidades de desarrollar afecciones potencialmente mortales como la enfermedad hemolítica del recién nacido aumentan significativamente.
Las anemias hemolíticas generalmente se deben a una hiperactivación del sistema inmunológico que conduce a la formación de anticuerpos contra los glóbulos rojos del cuerpo, que también se conoce como anemia hemolítica autoinmune. Y los síntomas pueden contener:
- Dificultad para respirar
- Falta de energía y creciente sensación de cansancio.
- Orina de color oscuro e ictericia
- Bajo recuento de glóbulos rojos en los análisis de sangre.
- Extremidades frías incluyendo manos y pies
- Problemas del corazón como soplo o insuficiencia cardíaca, y corazón irregular
¿Cómo se realiza la prueba de antiglobulina directa?
Principio de funcionamiento de DAT
La prueba directa de antiglobulina ayuda a detectar el recubrimiento de anticuerpos vivo de sus glóbulos rojos (los anticuerpos podrían ser IgG, un complemento o ambos). En el torrente sanguíneo, los glóbulos rojos tienen ciertos antígenos que ofrecen sitios de unión a los anticuerpos. Cualquier desencadenante o respuesta que pueda activar estos sitios de unión puede estimular los síntomas de la anemia hemolítica. Esta es la base de la HDN (enfermedad hemolítica de los recién nacidos), la anemia hemolítica autoinmune y la reacción de transfusión. La activación y el recubrimiento también pueden ser causados por ciertos medicamentos.
En esta prueba, los glóbulos rojos se lavan y luego se incuban con suero humano. Esta técnica permite que los anticuerpos se unan a los antígenos en los glóbulos rojos. El proceso implica el lavado y la adición de anti-globulina humana. Si se produce aglutinación después de la adición de anti-globulina humana (a veces llamada reactivo de Coombs), entonces es un signo de recubrimiento de anticuerpos sobre las células in vivo. Es imperativo mencionar que tanto los anticuerpos IgG como los IgM pueden detectarse utilizando esta prueba.
Técnicas de DAT
- Tome los RBC del paciente de un EDTA (ácido etilendiaminotetraacético), que garantiza que la muestra esté anticoagulada.
- Dispense una gota de suspensión de glóbulos rojos (2% -5%) por separado en cada uno de los 4 tubos de ensayo y marque los 4 tubos con etiquetas: Poly, Control, anti-IgG y anti-C3.
- Lave los glóbulos rojos con solución salina y luego incline el tubo boca abajo para decantar la solución salina. Luego, limpie los fondos de los tubos con la solución salina izquierda y repita esto de 3 a 4 veces. Secar los tubos con un paño absorbente.
- Agregue dos gotas de AHG poliespecífico en el tubo “Poli” y dispense dos gotas de BSA al 6% al tubo “Control”.
- Agite suavemente para combinar el contenido de los tubos, y los glóbulos rojos de cada tubo formarán un gránulo o un botón que se someterá a pruebas de aglutinación. Registrar los resultados.
- Si el reactivo poliespecífico muestra resultados positivos, se necesitarán pruebas específicas con reactivos anti-IgG anti-C3 para identificar el recubrimiento celular, ya sea un anticuerpo, un complemento o ambos.
- Dispense 2 gotas de anti-IgG AHG en el tubo “anti-IgG”, y 2 gotas de anti-C3 AHG en el tubo “anti-C3”. Agitar para combinar el contenido.
- La prueba debe ser muy sensible, por lo que tendremos que incubar todos los negativos durante 5 minutos para mejorar el recubrimiento. Para detectar debilidad en el recubrimiento, observe todos los negativos con un microscopio.
- Si se ha utilizado el tubo superior rojo para recoger la muestra, pueden aparecer resultados falsos positivos.
- Cuando se produce la coagulación o se enfría, se debe a la debilidad de los autoanticuerpos de acción en frío, incluido el anti-I, que se produce en el complemento in vitro.
- Evite el tubo superior de lavanda para atar los iones de calcio y magnesio.
- Evitar la activación del complemento in vitro.
10. En caso de DAT positivo, obtenga la siguiente información sobre el paciente:
- Diagnóstico de ciertas enfermedades.
- Medicación apropiada
- Historia de la transfusión de glóbulos rojos y componentes del plasma.
- Otras pruebas que indican destrucción en glóbulos rojos.
Cómo interpretar los resultados de la prueba
Sabemos que los anticuerpos se adhieren a los glóbulos rojos cuando DAT es positivo. El grado de positividad depende de la fuerza de DAT y al mismo tiempo la cantidad de anticuerpos unidos. Pero si los RBC ya están destruidos, esta situación no siempre se relaciona con la gravedad. En la prueba de antiglobulina directa, los anticuerpos se detectan sin identificar la causa y el tipo de anemia hemolítica. Para descubrir las razones detrás de esto, se debe observar el historial médico y se debe realizar un examen médico, por ejemplo, historial de transfusión, reacción al medicamento, etc.
Es importante mencionar que un pequeño segmento de las pruebas de población DAT positivo sin experimentar o manifestar ningún signo de anemia hemolítica. Si DAT es negativo, sugiere que los anticuerpos no están unidos a los RBC. Por lo tanto, otras causas pueden ser detectadas e investigadas.
Algunas situaciones en las que DAT es positivo son:
- Anemia hemolítica autoinmune (debido a la hiperactividad del sistema inmunológico contra los glóbulos rojos)
- El desarrollo de anticuerpos en los glóbulos rojos (RBC), la condición se llama “toxicidad del fármaco”. Es causada por algunos medicamentos que incluyen cefalosporinas, levopoda, dapsona, nitrofurantión, AINE como el ibuprofeno.
- Cuando la sangre donada es atacada por el sistema inmunológico (como parte de la reacción de transfusión)
- Los tipos de sangre de la madre y el bebé son diferentes.
- Leucemia incluyendo leucemia linfocítica crónica
- Un problema autoinmune llamado lupus.
- Mononucleosis
- Sífilis
- Infección por micoplasma.
A veces, los resultados de la prueba directa de antiglobulina pueden ser imposibles incluso sin ninguna enfermedad o riesgo. Además, algunos medicamentos pueden interrumpir la prueba y algunos pueden dar resultados positivos sin tener anemia hemolítica. Algunos medicamentos que pueden causar anemia hemolítica son:
- Algunos antibioticos
- Insulina
- Algunos medicamentos particulares para la presión arterial